好好的血清,咋就不管用了?注意,这些解冻和储存方法一定要学!
刚到货的血清应该怎样储存?
血清到底要怎样解冻才能保证活性?
血清在4℃冰箱能放多久?
作为一名细胞培养大户,你是不是经常会纠结上面这些问题?毕竟血清这种金贵的东西,可得好好珍惜,一个不小心,就可能导致实验失败,免不了要被导师责备。
那这些问题到底应该怎样解决?有没有标准答案?身为一个资深的代理商,关于血清的储存和解冻问题我们可是有好好研究过的。
如果你也存在同样的疑惑,那就请接着往下看吧。
一、常规储存
首先,当到货的血清,趁着它还冻手,赶紧放进-20℃冰箱中,避免反复冻融。当然,如果你的课题组不差钱,-80℃冰箱空间充足,把血清储存进去也是没有问题的。
二、如何解冻
很多同学会说,不就是解冻血清嘛,这题我会——放4℃过夜!
emmm……怎么说呢,直接在4℃冰箱里过夜融化的方法,虽然很多人在这么用,但还是有一些潜在的风险的。
我们都知道,在血清这种混合物中,融化速度蛋白质等干物质>水这类溶剂,所以蛋白质会率先溶解析出,而水还是结成冰的状态,导致瓶子中间会出现一根透明的冰柱,而周围则会呈现上黄下红的分层浑浊液体状态,在使用过程中很容易出现沉淀、混合不均匀、局部浓度过高等现象,影响细胞生长。
更重要的一点,血清中最珍贵的是生长因子等活性物质,与复苏细胞原理类似,都需要快速解冻才能最大程度地保留生物活性,4℃过夜处理时间过长,有可能会损失一部分「营养成分」,影响细胞生长。
所以,更好保留血清中活性成分,使细胞培养更稳定,我们推荐使用三步法溶解,具体方法见下表,有需要的同学可以截图保存。
如果是储存在-80℃的血清,则需提前几天先转移至-20℃冰箱中(至少24小时),再使用三步溶解法,避免温差过大使血清失活。
注:此方法国际通用,适用于所有培养基,在水浴过程中,血清的平面要完全浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动瓶身,使血清混匀,但摇动中尽量不要产生泡沫!
彻底解冻血清后,可以根据实验需求,将其分装,保证每一份够一次使用量即可,比如25ml/管、50ml/管等。密封好后赶紧放回-20℃冰箱继续储存。需要配制培养基的时候,从-20℃取出一管来解冻使用(最好能全部配成培养基,不要有剩余),能够有效避免反复冻融的问题(遵循现用现配、现配现解冻的原则)。配好的培养基可以放到4℃冰箱进行储存。
看到这里,问题又来了,配置好的培养基,或者用剩下的一点点血清,能在4℃冰箱里放多久呢?
先给出我们认为比较合理的答案,再来解释原因:
7天
一般情况下,血清解冻,无论是配成完全培养基还是在冰箱里备用,都不要超过一周(7天),原因也很简单,存放太久,生长因子等物质容易失活,而且比较容易污染,影响实验结果。
不知道今天这期内容有没有解决大家的疑惑,无论是国产还是进口培养基,都不算便宜,这么贵巴巴的试剂,还请小心使用,让它们的功效最大化,可不能让银子白花!返回搜狐,查看更多